JC-1是一種廣泛應用于線粒體膜電位(?Ψm)檢測的理想脂溶性陽離子熒光探針。該探針可特異性作用于細胞、組織或純化的線粒體,通過熒光顏色的電勢依賴性轉變,精準反映線粒體膜電位變化,是細胞凋亡早期檢測的核心指標之一。
其檢測原理為:在線粒體膜電位較高的健康細胞中,JC-1會聚集于線粒體基質內形成聚合物,產生紅色熒光;當線粒體膜電位下降(細胞凋亡早期標志性事件)時,JC-1無法在基質內聚集,以單體形式存在,產生綠色熒光。實驗中可通過紅綠熒光的相對比例,定量衡量線粒體去極化程度,進而判斷細胞凋亡狀態。
本產品為高純度粉末形式,僅用于專業科研用途,嚴禁用于臨床診斷、治療、食品、藥品及化妝品等領域。
粉末:密封干燥,-20℃避光儲存,可穩定保存2年。
儲存液(DMSO配制):-20℃避光分裝保存可穩定6個月;-80℃避光儲存可穩定1年,嚴禁反復凍融。
工作液:現配現用,配制后需避光放置,建議30分鐘內完成使用。
1. JC-1是光敏感性的,所有染色步驟的操作過程中避免強光接觸。
2. 無論是粉末分裝還是儲存液分裝,均需避免反復凍融,否則會導致產品失效。
3. 使用DMSO作為溶劑時,終濃度需< 0.3%(細胞實驗)或< 5%(體內實驗),避免溶劑毒性影響結果。
4. 由于樣本類型和實驗環境的不同均會影響染色效率,建議通過預實驗來優化JC-1工作液濃度和染色時間。
5. 染色完成后需立即進行后續分析,避免熒光衰減或細胞狀態變化導致結果偏差。
6. 若用于細胞培養,需提前通過0.22 μm濾膜過濾除菌,去除熱原細菌,避免染菌。
pdf
下載
Q1:紅色熒光信號太弱怎么辦?
a. 確認JC-1工作液終濃度是否為推薦范圍(建議2-10 µg/mL,可從低至高預實驗優化)。
b. 染色時間不足,可延長37℃孵育時間至30~45分鐘。
c. 細胞狀態不佳或膜電位本底偏低,需使用健康傳代的細胞并設置陽性對照驗證。
Q2:綠色背景熒光過高怎么辦?
a. 洗滌不充分,需用預熱的HBSS或完全培養基洗滌2~3次。
b. 染料濃度過高,可降低JC-1工作液濃度至2~5 µM重新測試。
c. 通道串色(流式/共聚焦),需用單染樣本校準熒光補償。
Q3:紅綠熒光比值變化不明顯怎么辦?
a. 凋亡誘導不充分,需優化誘導劑濃度和作用時間。
b. 檢測參數未優化,確保紅色通道未飽和、綠色通道靈敏度足夠。
c. 試劑可能失效,需使用新鮮配制的JC-1工作液和對照試劑。
Q4:流式細胞圖中細胞群分群不清怎么辦?
a. 細胞碎片過多,需在分析前用細胞篩過濾并正確設門排除碎片。
b. 胰酶消化過度,建議使用溫和消化試劑并嚴格控制時間。
c. 染色不均勻,加入染料后需輕柔混勻。
Q5:細胞在染色后變圓、脫落怎么辦?
a. 錯誤使用了不含Ca²?/Mg²?的緩沖液,全程需使用HBSS或含離子的PBS。
b. 洗滌操作過于劇烈,應輕柔吸棄液體避免直接沖洗細胞。
c. 染料濃度過高產生毒性,需降低工作液濃度并縮短孵育時間。
Q6:實驗結果重復性差怎么辦?
a. 細胞狀態和代次不一致,需統一使用低代次(如15代以內)細胞。
b. 儀器參數漂移,每次實驗前需用同批次陽性對照細胞校準。
c. 染色條件波動,需固定染料孵育時間、溫度及洗滌流程。